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組換えタンパク質受託製造サービス FAQ
製品ガイド
パッケージには、発泡スチロール製の保持箱、梱包リスト、青色のアイスボックス（またはMCE® Cooling Rack）、化合物製品が含まれています。パッケージを開封した後、すべての内容物が揃っていることを確認してください。不足または誤りがある場合は、609-228-6898までご連絡ください。アフターサービススタッフが対応いたします。
A: 製品の発送後、自動的にデータシートとQAドキュメントをメールで送信します。 B: これらのファイルは、[email protected]の製品ウェブページからもダウンロードできます。 609-228-6898に電話するか、[email protected]までメールでカスタマーサービスにご連絡ください。
ほとんどのMedChemExpress（MCE）阻害剤は室温で比較的安定しているため、ブルーアイスが溶けても製品の品質には影響しません。
製品は自由に使用できます。環境に対してより敏感な特別な化合物については、製品の安定性を確保するために追加の包装を提供します。
推奨される保管条件および適切な製品取り扱いに関する注意事項は、製品COAに記載されています
以下は、いくつかの代表的な化合物の保管ガイドラインです：
| 粉末: | -20°C | 3年間 |
| 4°C | 2年間 | |
| 溶液: | -80°C | 6ヶ月 |
|---|---|---|
| -20°C | 1ヶ月 |
溶液が-20°Cで1ヶ月以上保管される場合、その有効性を確保するために再検査が必要です。凍結と解凍の繰り返しを避けてください。
一部の特別な製品の保管条件は、製品COAを参照してください。
輸送中に化合物がバイアルの首やキャップに付着することがあります。バイアルを開ける前に、遠心分離機を使用して化合物をバイアルの底に集めてください。
実験のニーズに基づいてストック溶液の調製に適した溶媒を選択してください
溶解性の情報は製品のウェブページにあります。現在、DMSOおよび/または水の溶解データのみ提供しています。他の溶媒の溶解性については、[email protected]までメールしてください。お探しの溶解性情報が見つからない場合や、製品の溶液調製に困難がある場合は、上記のメールでサポートを受けることができます。調製が完了したら、ストック溶液を使用量に応じて分注し、-20°Cまたは-80°Cで保存してください。繰り返しの冷凍と解凍を避けてください。
計算には、MedChemExpress (MCE) 公式ウェブサイトのモル濃度計算機をお勧めします: www.MedChemExpress.com/molarity-calculator.html
ddH2Oを溶媒として使用するストック溶液は、直接培地で希釈して作業溶液を調製できます。
DMSOを使用してストック溶液を調製する場合、ストック溶液は培地で希釈して作業溶液を調製します。DMSOの濃度が<0.5%であることを確認し、細胞中毒を避けてください。実験のネガティブコントロールは通常、同じ濃度のDMSOを含む培地です。濃度の急速な変化による化合物の沈殿を避けるために、段階的に希釈することをお勧めします。
ddH2Oを溶媒として使用するストック溶液は、直接培地で希釈して作業溶液を調製できます。
DMSOを溶媒として使用するストック溶液も、PBSまたは0.9％NaClで希釈して作業溶液を準備することができます。動物への毒性を減らすために、作業溶液中のDMSOの最終濃度は2％以下が望ましいです。低い水溶性のために希釈プロセス中に沈殿物が形成される場合は、化合物を溶解するために補助溶媒を使用することもできます。一般的な補助溶媒には、グリセロール、ツイーン80、カルボキシメチルセルロースナトリウム（CMC-Na）、シクロデキストリン、PEG400などがあります。懸濁液は経口または腹腔内注射にも使用できます。さらなる支援が必要な場合は、[email protected]までメールを送信してください。
論文で使用されている投与方法と溶媒の準備方法は、製品のウェブページで確認できる場合があります。MedChemExpress（MCE）はこれらの方法の正確性を独自に確認しておらず、参考のためにのみ配布されています。
Administration volumes considered good practice (and possible maximal dose volumes):
| Species | Route and volumes (mL/kg) | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Oral | s.c. | i.p. | i.m. | i.v. (bolus) | i.v. (slow inj.) | |
| Mouse | 10 (50) | 10 (40) | 20 (80) | 0.05 (0.1) | 5 | (25) |
| Rat | 10 (40) | 5 (10) | 10 (20) | 0.1 (0.2) | 5 | (20) |
| Rabbit | 10 (15) | 1 (2) | 5 (20) | 0.25 (0.5) | 2 | (10) |
| Dog | 5 (15) | 1 (2) | 1 (20) | 0.25 (0.5) | 2.5 | (5) |
Conversion of different model animals based on BSA:
| Species | Weight (kg) | Body Surface Area (m2) | Km factor |
|---|---|---|---|
| Dog | 10 | 0.5 | 20 |
| Rabbit | 1.8 | 0.15 | 12 |
| Guinea pig | 0.4 | 0.05 | 8 |
| Rat | 0.15 | 0.025 | 6 |
| Hamster | 0.08 | 0.02 | 5 |
| Mouse | 0.02 | 0.007 | 3 |
| Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by | Animal B Km |
| Animal A Km |
DMSO自体は強い殺菌作用を持ち、化合物に細菌を持ち込むことはありません。しかし、実験使用前に操作環境と機器を無菌に保つことが重要です。化合物は、特定の実験要件に応じて使用前にろ過によって無菌化することもできます。高温および高圧での滅菌は推奨されません。
組換えタンパク質受託製造サービス FAQ
MCEでは、His、GST、MBP、Flag、GFP、Fc、Aviタグなど、各種融合タグに対応しています。各タグには、アフィニティー精製、可溶性の向上、検出などの面でそれぞれ異なる特長があります。詳細な特性は下表のとおりです。
また、タグフリータンパク質の提供にも対応しています。方法は二つあり、タグと目的タンパク質の間にプロテアーゼ切断部位を導入し、精製後にタグを除去する方法と、タグを付加しない発現プラスミドを直接構築し、イオン交換クロマトグラフィーなどにより目的タンパク質を精製する方法です。
| タグ | MW | 特長 |
|---|---|---|
| His | < 1 kDa | 分子量が最も小さく、タンパク質の構造や機能への影響が最小限です。最も広く利用されており、複数タグとの組み合わせにも対応できます。 |
| GST | ~ 26 kDa | 細胞内における融合タンパク質の溶解性を著しく向上させます。分子量は大きいものの、必要に応じて除去可能です。 |
| Flag | ~ 1 kDa | 細胞内における融合タンパク質の溶解性を著しく向上させます。分子量は大きいものの、必要に応じて除去可能です。 |
| GFP | ~ 27 kDa | 蛍光タグであり、染色を行わずに、発現、局在、輸送、相互作用をリアルタイムでモニタリングできます。 |
| Fc | ~ 25 kDa | 融合により、ジスルフィド結合を介した二量体化が生じます。 |
| Avi | ~ 1.8 kDa | 部位特異的かつ均一なビオチン化に適した短いペプチドタグです。 |
MCEでは、部位特異的ビオチン化とランダムビオチン化のいずれにも対応しています。お客様の実験目的に応じて、適切なビオチン化方法を選択いただけます。
ビオチン化タンパク質の納品時には、ビオチン標識の確認および標識効率の評価のため、通常、HABA法による測定結果をあわせて提供しています。
対応可能な精製方法には、アフィニティークロマトグラフィー（AC）、イオン交換クロマトグラフィー（IEX）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（HIC）、サイズ排除クロマトグラフィー（SEC）が含まれます。精製方法は、お客様の要件および目的タンパク質の特性に応じて選定します。
各精製方法の特長と主な用途は以下のとおりです。
| 精製法 | 特長 | 用途 |
|---|---|---|
| AC | タンパク質上のタグ（His、GST、Flag など）と対応するリガンドとの特異的結合を利用し、高効率に回収します。 | 組換えタグ付きタンパク質の精製に適しています。 |
| IEX | 特定の pH 条件下における表面の表面電荷の違いに基づいて分離します。 | 天然型タンパク質やタグ付きタンパク質のポリッシング工程、または組換えタグフリータンパク質の精製に適しています |
| HIC | タンパク質の表面疎水性の違いに基づいて分離します。高塩濃度で結合を促進し、塩濃度を下げながら穏やかに溶出します。 | 膜タンパク質や高疎水性タンパク質の精製に適しています。 |
| SEC | 溶液中のタンパク質の分子サイズおよび形状の違いに基づいて分離します。 | 通常、最終ポリッシング工程として、凝集体、分解産物、その他の微量不純物の除去に用いられます。 |
菌体破砕上清から精製するか、封入体から精製するかは、主に目的タンパク質の特性とお客様のご利用目的によって決まります。可溶性で発現するタンパク質は、通常、菌体破砕上清から直接精製します。
封入体として発現するタンパク質については、封入体リフォールディングサービスにも対応しています。
一般に、封入体由来タンパク質では、まず精製を行い、その後リフォールディングを行います。リフォールディング工程では、複数のリフォールディングバッファーをスクリーニングし、タンパク質がネイティブ状態に近い構造をとれる最適条件を特定します。
MCEの受託製造タンパク質では、標準品質管理項目として、SDS-PAGE（分子量確認および純度評価、純度90%以上）、タンパク質濃度測定、エンドトキシン試験（<1 EU/μg）、および0.22 μmフィルターによるろ過滅菌を実施しています。
また、通常は凍結乾燥粉末として提供し、保冷剤同梱で出荷します。特別な要件がある場合は、事前確認のうえ、液体タンパク質にも対応し、ドライアイスで出荷します。
MCEでは、共通の標準バッファーは一律には設定していません。一般的には、PBS、Tris、HEPES などのバッファー系を使用します。タンパク質の特性やご利用目的に応じて最適なバッファーを選定し、タンパク質の活性と安定性を確保します。
また、タンパク質の特性や用途に応じて、ご要望があれば、グリセロールやトレハロースなどの安定化剤、あるいは温和な界面活性剤をバッファーに添加することも可能です。